NR5A2 Double Nickase Plasmid (h): sc-402656-NIC

NR5A2 (nukleärer Rezeptor der Unterfamilie 5, Gruppe A, Mitglied 2; LRH-1) ist ein verwaister nukleärer Rezeptor-Transkriptionsfaktor, der an Hormon-Response-Elemente bindet, um Genprogramme zu regulieren, die die Homöostase von Cholesterin und Gallensäuren, die Steroidogenese und den Lipidstoffwechsel steuern. In epithelialen Kontexten unterstützt NR5A2 außerdem Proliferations- und Differenzierungszustände, indem es Signale aus der nukleären Rezeptor-Signalgebung mit metabolischen und entwicklungsbezogenen Transkriptionsnetzwerken integriert. Seine Aktivität überschneidet sich mit Signalwegen, die die Pankreas- und Leberfunktion regulieren, und eine veränderte NR5A2-Expression oder regulatorische Varianten wurden mit krankheitsrelevanten Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter Entzündung und krebsassoziierte transkriptionelle Umprogrammierung. Als Regulator, der mit Linienzugehörigkeit und Stoffwechsel verknüpft ist, wird NR5A2 häufig in Modellen der gastrointestinalen, hepatischen und pankreatischen Biologie sowie in Analysen transkriptioneller Schaltkreise untersucht.

NR5A2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NR5A2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NR5A2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NR5A2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NR5A2-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.