Plasmide CRISPR/Cas9 KO NR3B (h): sc-406162

Présentation

GRIN3B code la sous-unité NR3B des récepteurs N‑méthyl‑D‑aspartate (NMDA), une classe de récepteurs glutamatergiques ionotropes qui régulent la transmission synaptique excitatrice et la signalisation dépendante du Ca²⁺ dans le système nerveux central. L’incorporation de sous-unités de la famille NR3 peut modifier la biophysique du récepteur, notamment la sensibilité aux agonistes et les propriétés du canal, ajustant ainsi la plasticité synaptique et la régulation de l’expression génique dépendante de l’activité. La modulation de la signalisation glutamatergique liée à GRIN3B recoupe des voies contrôlant le développement neuronal, l’affinement des circuits et l’homéostasie du calcium. Une dysrégulation de la fonction des récepteurs NMDA est pertinente pour l’étude de phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, des réponses au stress excitotoxique et des mécanismes de connectivité synaptique altérée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NR3B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GRIN3B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GRIN3B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GRIN3B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NR3B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GRIN3B pour l'étude de la signalisation de NR3B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GRIN3B essentiels à la fonction de NR3B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GRIN3B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NR3B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NR3B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GRIN3B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NR3B plasmide HDR (h) et le NR3B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GRIN3B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GRIN3B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.