Plasmide CRISPR/Cas9 KO NR3A (h): sc-403378

Présentation

GRIN3A code la sous-unité humaine NR3A des récepteurs N-méthyl-D-aspartate (NMDA), un complexe de canaux ioniques activés par le glutamate qui module la transmission synaptique et l’excitabilité neuronale. L’incorporation de NR3A dans les récepteurs NMDA modifie les propriétés du canal, notamment une perméabilité réduite au Ca2+ et un blocage par le Mg2+ altéré, influençant ainsi le remodelage synaptique et la plasticité dépendants de l’activité. L’expression de GRIN3A est régulée au cours du développement et est impliquée dans des processus tels que l’équilibre excitation/inhibition, la maturation dendritique et l’affinement des circuits. Une composition dérégulée des sous-unités des récepteurs NMDA, notamment des niveaux modifiés de NR3A, a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ce qui soutient son utilisation dans des études mécanistiques de la signalisation synaptique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NR3A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GRIN3A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GRIN3A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GRIN3A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NR3A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GRIN3A pour l'étude de la signalisation de NR3A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GRIN3A essentiels à la fonction de NR3A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GRIN3A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NR3A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NR3A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GRIN3A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NR3A plasmide HDR (h) et le NR3A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GRIN3A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GRIN3A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.