Plásmido CRISPR de Activación (h) NR3A: sc-403378-ACT

GRIN3A codifica la subunidad NR3A de los receptores de N-metil-D-aspartato (NMDA), una familia de receptores ionotrópicos de glutamato que regula la neurotransmisión excitatoria permeable al calcio y la plasticidad sináptica. La incorporación de NR3A en los ensamblajes del receptor modula las propiedades del canal, influyendo en la excitabilidad neuronal, la señalización dependiente de la actividad y la maduración de los circuitos. A través de sus efectos sobre la transmisión glutamatérgica, NR3A contribuye a vías que gobiernan el neurodesarrollo, el refinamiento de sinapsis y la remodelación dependiente de la experiencia. La alteración de la expresión de GRIN3A o del equilibrio de subunidades del receptor NMDA se ha asociado con fenotipos neuropsiquiátricos y del neurodesarrollo, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de la desregulación de la señalización excitatoria.

NR3A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GRIN3A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NR3A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GRIN3A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GRIN3A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NR3A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GRIN3A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NR3A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NR3A en células tumorales con expresión de GRIN3A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.