Plasmide CRISPR d'Activation (h) NQO2: sc-402200-ACT

Le gène humain NQO2 (NRH:quinone oxydoréductase 2) code une flavoprotéine cytosolique qui catalyse la réduction à deux électrons des quinones et d’électrophiles apparentés, influençant l’équilibre rédox cellulaire et la capacité de détoxification. En modulant le cycle des quinones et la formation d’espèces réactives de l’oxygène, NQO2 intervient dans les réponses au stress oxydant, le métabolisme des xénobiotiques et, plus largement, les réseaux rédox dépendants du NAD(P)H. Des altérations de l’expression et de l’activité de NQO2 ont été associées à des phénotypes liés au stress métabolique, à l’inflammation et à la sensibilité cellulaire aux dommages médiés par des électrophiles, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de l’adaptation au stress. En biologie du cancer comme en neurobiologie, NQO2 est souvent étudié dans le contexte de l’homéostasie rédox, de la sensibilité aux dommages de l’ADN et des changements de signalisation induits par des métabolites électrophiles.

NQO2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NQO2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NQO2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NQO2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NQO2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NQO2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NQO2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NQO2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NQO2 dans les cellules tumorales présentant une expression de NQO2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.