Plasmide Double Nickase (h) NQO1: sc-400326-NIC

NQO1 (NAD(P)H quinone déshydrogénase 1) est une flavoprotéine cytosolique qui catalyse la réduction des quinones en hydroquinones par transfert de deux électrons, limitant ainsi le cyclage rédox et la production d'espèces réactives de l'oxygène. Elle agit comme un effecteur clé de la réponse au stress oxydant NRF2/KEAP1 et contribue à la détoxification cellulaire, au maintien de l'homéostasie rédox et à la protection des macromolécules contre les dommages électrophiles. Par son rôle dans le métabolisme des xénobiotiques et les défenses antioxydantes, NQO1 influence la sensibilité cellulaire aux lésions oxydatives et au stress inflammatoire. Des altérations de l'activité ou de l'expression de NQO1 ont été associées à des variations de la tolérance au stress et à des phénotypes liés à la maladie dans les recherches sur la biologie du cancer, la neurodégénérescence et les dysfonctions cardiométaboliques.

NQO1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NQO1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NQO1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NQO1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NQO1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.