Plasmide CRISPR/Cas9 KO NPY5-R (m): sc-421954

Présentation

Npy5r code le récepteur Y5 du neuropeptide Y (NPY5-R), un RCPG couplé à Gi/o qui se lie au neuropeptide Y et à des peptides apparentés afin de moduler les niveaux intracellulaires d’AMPc et la signalisation des kinases en aval. Dans le système nerveux central, NPY5-R contribue à la régulation du comportement alimentaire, de l’homéostasie énergétique, de la réactivité au stress et des sorties neuroendocrines, via l’intégration de circuits hypothalamiques et limbiques. L’activation du récepteur influence la transmission synaptique, l’excitabilité neuronale et la plasticité des réseaux neuropeptidergiques, reliant ainsi Npy5r à des voies qui contrôlent l’appétit et la régulation métabolique. Une signalisation NPY dysrégulée a été associée à des phénotypes liés à l’obésité ainsi qu’à des processus affectifs et liés au stress, faisant de Npy5r une cible utile pour des études mécanistiques dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NPY5-R (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Npy5r dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Npy5r, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Npy5r à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NPY5-R.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Npy5r pour l'étude de la signalisation de NPY5-R, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Npy5r essentiels à la fonction de NPY5-R
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Npy5r pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NPY5-R plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le NPY5-R plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Npy5r. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NPY5-R plasmide HDR (m) et le NPY5-R (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Npy5r pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Npy5r définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.