NPT2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402216

Descripción general

SLC34A1 codifica el cotransportador humano de fosfato dependiente de sodio 2A (NPT2), un cotransportador de la membrana apical que media la captación electrogénica de fosfato inorgánico acoplada a los gradientes de Na+ en células epiteliales. NPT2 es un determinante clave de la homeostasis del fosfato y participa en vías de reabsorción del túbulo proximal renal que se entrecruzan con el metabolismo de la vitamina D, la señalización de la hormona paratiroidea y el manejo del fosfato regulado por FGF23. La alteración de la función de SLC34A1 se ha asociado con trastornos del equilibrio del fosfato, incluidos fenotipos vinculados a nefrolitiasis, hipofosfatemia y defectos de mineralización, lo que la hace relevante para el estudio de la regulación del transporte epitelial y la señalización metabólica. A nivel celular, la perturbación de SLC34A1 puede utilizarse para investigar el tráfico de membrana, la cinética del transportador y el control dependiente del fosfato de la bioenergética y del metabolismo de la biomineralización.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NPT2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SLC34A1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SLC34A1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SLC34A1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NPT2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SLC34A1 para la investigación de la señalización de NPT2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SLC34A1 críticos para la función de NPT2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SLC34A1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NPT2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido NPT2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SLC34A1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NPT2 (h) y el plásmido HDR NPT2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SLC34A1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SLC34A1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.