Plasmide CRISPR/Cas9 KO NPM3 (m): sc-421944

Présentation

La protéine Npm3 murine code la nucléophosmine/nucléoplasmine 3 (NPM3), une protéine nucléolaire impliquée dans la biogenèse des ribosomes et l’homéostasie du nucléole, via la régulation du traitement de l’ARNr et de l’assemblage des ribonucléoprotéines. NPM3 participe à des processus associés à la chromatine et à la dynamique nucléocytoplasmique en interagissant avec d’autres facteurs nucléolaires, reliant ainsi la fonction nucléolaire à la progression du cycle cellulaire et aux réponses au stress. La perturbation des protéines nucléolaires de cette voie peut influencer le contrôle de la prolifération, la stabilité génomique et des programmes transcriptionnels pertinents pour la transformation oncogénique et la biologie des hémopathies malignes. En tant que composant d’échafaudage du nucléole, NPM3 constitue un point d’entrée utile pour analyser comment l’intégrité nucléolaire module les signaux de croissance et l’adaptation cellulaire au stress protéotoxique ou génotoxique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NPM3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Npm3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Npm3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Npm3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NPM3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Npm3 pour l'étude de la signalisation de NPM3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Npm3 essentiels à la fonction de NPM3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Npm3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NPM3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le NPM3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Npm3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NPM3 plasmide HDR (m) et le NPM3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Npm3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Npm3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.