Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Plasmide CRISPR/Cas9 KO NPC1L1 (h): sc-401741
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- NPC1L1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique NPC1L1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: NPC1L1 Antibody (G-1): sc-166802
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO NPC1L1 (h) | sc-401741 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
NPC1L1 (Niemann-Pick C1-like 1) est une protéine membranaire multipasse qui assure l’absorption cellulaire du cholestérol d’origine alimentaire et biliaire, ainsi que d’autres stérols, en agissant à la membrane plasmique et au sein des compartiments du trafic endocytique. Elle participe à la détection des stérols et aux processus de transport vésiculaire qui influencent l’homéostasie lipidique intracellulaire et la gestion des lipoprotéines. L’activité de NPC1L1 s’inscrit à l’interface de voies contrôlant l’absorption du cholestérol, la composition membranaire et la signalisation dépendante des lipides. Une dérégulation du transport des stérols associé à NPC1L1 est pertinente pour des phénotypes métaboliques liés à un déséquilibre du cholestérol et à des états inflammatoires induits par les lipides.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NPC1L1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NPC1L1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NPC1L1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NPC1L1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NPC1L1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NPC1L1 pour l'étude de la signalisation de NPC1L1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de NPC1L1 essentiels à la fonction de NPC1L1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NPC1L1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le NPC1L1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NPC1L1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NPC1L1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le NPC1L1 plasmide HDR (h) et le NPC1L1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NPC1L1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NPC1L1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.