Particules Lentivirales d'Activation (h) NPAS4: sc-402373-LAC

NPAS4 (neuronal PAS domain protein 4) est un facteur de transcription bHLH-PAS (basic helix–loop–helix PAS) dépendant de l’activité, qui couple la signalisation calcique à des programmes transcriptionnels rapides dans les neurones. Il régule l’équilibre excitation–inhibition en contrôlant des réseaux géniques impliqués dans la formation des synapses, l’ajustement (scaling) synaptique inhibiteur et la signalisation des neurotrophines, y compris des voies liées à la transcription induite en réponse au BDNF. NPAS4 est impliqué dans la plasticité neuronale, l’apprentissage et la mémoire, ainsi que dans les circuits sensibles au stress, et une régulation altérée de NPAS4 a été associée à des phénotypes pertinents pour des maladies neuropsychiatriques et neurodégénératives. En tant que régulateur transcriptionnel sensible au contexte, il est largement utilisé pour étudier l’expression génique induite par des stimuli et les adaptations des circuits dans des modèles neuronaux humains.

Les particules d'activation lentivirales NPAS4 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de NPAS4 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales NPAS4 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription NPAS4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de NPAS4. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif NPAS4 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.