NPAS4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-432569-ACT

O gene Npas4 de camundongo codifica a proteína 4 do domínio PAS neuronal (NPAS4), um fator de transcrição PAS do tipo basic helix–loop–helix dependente de atividade, que conecta o influxo de cálcio a programas gênicos que controlam o desenvolvimento de sinapses inibitórias e o equilíbrio entre excitação e inibição. A NPAS4 regula redes transcricionais envolvidas na plasticidade sináptica, no refinamento de circuitos e na remodelação responsiva a estímulos, integrando sinais da despolarização neuronal e de vias associadas ao CREB a jusante. Alterações na expressão de NPAS4 têm sido associadas, em contextos de pesquisa, a fenótipos neuropsiquiátricos e do neurodesenvolvimento, incluindo adaptações comportamentais relacionadas ao estresse, suscetibilidade a convulsões e disfunção cognitiva, destacando sua relevância para mecanismos de estabilidade de redes neurais. Como regulador de resposta precoce e rápida, a NPAS4 é amplamente utilizada para investigar como a atividade neuronal remodela estados transcricionais e a conectividade sináptica.

NPAS4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Npas4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NPAS4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Npas4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Npas4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NPAS4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Npas4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NPAS4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NPAS4 em células tumorais com expressão de Npas4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.