Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nox5: sc-401223-ACT

NOX5 code pour Nox5, une NADPH oxydase activée par le calcium qui catalyse la production d’espèces réactives de l’oxygène (ROS) et module ainsi les voies de signalisation sensibles à l’état rédox. Les ROS dérivées de Nox5 influencent des voies qui contrôlent la prolifération et la migration cellulaires, le remodelage du cytosquelette et les réponses inflammatoires, via une régulation dépendante de l’oxydation de kinases, de phosphatases et de facteurs de transcription. Dans les tissus humains, l’activité de NOX5 a été associée à la signalisation endothéliale et des cellules musculaires lisses, à l’activation des cellules immunitaires et à la biologie du stress oxydant. Une expression ou une activité dérégulée de NOX5 est fréquemment étudiée dans des contextes de dysfonction cardiovasculaire, d’inflammation chronique et de remodelage rédox associé aux tumeurs, où une homéostasie des ROS altérée modifie des phénotypes cellulaires pertinents pour la maladie.

Nox5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NOX5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nox5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NOX5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NOX5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nox5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NOX5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nox5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nox5 dans les cellules tumorales présentant une expression de NOX5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.