Plásmido CRISPR de Activación (h) Nox4: sc-400298-ACT

El gen humano **NOX4** codifica Nox4, una NADPH oxidasa que genera de forma constitutiva especies reactivas de oxígeno (ROS), principalmente peróxido de hidrógeno, para regular la señalización redox. La actividad de Nox4 influye en procesos celulares que incluyen la diferenciación, la remodelación del citoesqueleto, la producción de matriz extracelular y la señalización de respuesta al estrés a través de vías como TGF-β/SMAD, MAPK y NF-κB. La señalización oxidativa impulsada por NOX4 cuando está desregulada se ha implicado en la fibrosis, la remodelación vascular, la disfunción metabólica y fenotipos asociados al cáncer, en los que el equilibrio redox modela la proliferación, la supervivencia y programas inflamatorios. Como fuente de ROS compartimentalizadas, Nox4 se estudia con frecuencia por sus funciones en la biología endotelial, la función de las células de músculo liso y las respuestas al estrés mitocondrial o ligadas al retículo endoplásmico.

Nox4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NOX4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nox4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NOX4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NOX4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nox4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NOX4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nox4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nox4 en células tumorales con expresión de NOX4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.