Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nox4: sc-400298-ACT

Le gène humain **NOX4** code Nox4, une NADPH oxydase qui génère constitutivement des espèces réactives de l’oxygène (ROS), principalement du peroxyde d’hydrogène, afin de réguler la signalisation rédox. L’activité de Nox4 influence des processus cellulaires tels que la différenciation, le remodelage du cytosquelette, la production de matrice extracellulaire et la signalisation en réponse au stress via des voies comme TGF-β/SMAD, MAPK et NF-κB. Une signalisation oxydative dérégulée pilotée par NOX4 a été impliquée dans la fibrose, le remodelage vasculaire, les dysfonctions métaboliques et des phénotypes associés au cancer, où l’équilibre rédox module la prolifération, la survie et les programmes inflammatoires. En tant que source de ROS compartimentées, Nox4 est fréquemment étudiée pour ses rôles dans la biologie endothéliale, la fonction des cellules musculaires lisses et les réponses au stress liées aux mitochondries ou au réticulum endoplasmique.

Nox4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NOX4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nox4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NOX4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NOX4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nox4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NOX4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nox4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nox4 dans les cellules tumorales présentant une expression de NOX4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.