Particules Lentivirales d'Activation (m) Notch 3: sc-421933-LAC

Notch3 code Notch 3, un récepteur transmembranaire à passage unique qui assure une signalisation juxtacrine contrôlant les décisions de destinée cellulaire, la différenciation et l’homéostasie tissulaire. Après liaison au ligand, un traitement protéolytique libère le domaine intracellulaire de Notch, qui régule des programmes transcriptionnels via des complexes RBPJ/CSL, en s’intégrant à des voies contrôlant la prolifération et l’engagement de lignée. Dans les systèmes murins, l’activité de Notch3 est particulièrement importante pour la biologie du muscle lisse vasculaire, les processus de neurodéveloppement et la fonction des cellules immunitaires, et une signalisation dérégulée est largement utilisée comme axe modèle pour étudier des phénotypes oncogéniques et développementaux dépendants du contexte. Comme la signalisation Notch dépend fortement de la dose et du timing, la modulation précise de Notch3 endogène est essentielle pour disséquer les interactions entre voies et la dynamique des réseaux transcriptionnels.

Les particules d'activation lentivirales Notch 3 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Notch3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Notch 3 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Notch3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Notch 3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Notch3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.