Particules Lentivirales d'Activation (h) Notch 2: sc-401323-LAC

Le gène humain NOTCH2 code Notch 2, un récepteur transmembranaire à passage unique qui assure une signalisation juxtacrine afin de contrôler les décisions de destinée cellulaire, la prolifération et la différenciation. Lors de la liaison à des ligands de type Delta ou Jagged, Notch 2 subit un clivage protéolytique libérant le domaine intracellulaire de Notch, qui se transloque dans le noyau et coopère avec RBPJ/CSL ainsi qu’avec des coactivateurs pour réguler des programmes transcriptionnels tels que HES et HEY. L’activité de NOTCH2 s’intègre à des voies du développement et influence l’homéostasie tissulaire, notamment dans les contextes immunitaire et épithélial. Une signalisation NOTCH2 dérégulée est impliquée dans des troubles congénitaux et dans la biologie des cancers, où une altération de l’activité de la voie affecte les états de différenciation et l’engagement de lignée.

Les particules d'activation lentivirales Notch 2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de NOTCH2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Notch 2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription NOTCH2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Notch 2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif NOTCH2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.