NOS2/iNOS Lentiviral Activation Particles (m): sc-421928-LAC

Nos2 kodiert die induzierbare Stickstoffmonoxid-Synthase (NOS2/iNOS), ein Enzym, das während entzündlicher und angeborener Immunantworten aus L-Arginin Stickstoffmonoxid erzeugt. Von iNOS gebildetes Stickstoffmonoxid moduliert Redox-Signalwege, die antimikrobielle Abwehr und Zytokinnetzwerke und greift dabei in NF-κB-, JAK/STAT- und MAPK-regulierte Transkriptionsprogramme in Makrophagen und anderen aktivierten Zelltypen ein. Eine veränderte Nos2-Aktivität wird in Modellen für Entzündung, Infektion und oxidativen Stress häufig als mechanistischer Readout genutzt, da Stickstoffmonoxid und reaktive Stickstoffspezies den zellulären Stoffwechsel, die Mitochondrienfunktion und das Gewebe-Remodeling beeinflussen. Eine fehlregulierte iNOS-Signalgebung wurde in experimentellen Systemen mit Bezug zu Autoimmunität, Neuroinflammation, kardiovaskulären Funktionsstörungen und tumorassoziierter Immunmodulation in Zusammenhang gebracht.

NOS2/iNOS Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Nos2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

NOS2/iNOS Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Nos2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen NOS2/iNOS-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Nos2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.