Plasmide Double Nickase (h) Nopp140: sc-402907-NIC

NOLC1 code la phosphoprotéine nucléolaire et des corps enroulés 1 (Nopp140), une protéine nucléolaire fortement phosphorylée qui fait la navette entre le nucléole et les corps de Cajal afin de soutenir la biogenèse des ribosomes et la dynamique des RNP nucléolaires (snoRNP) et des RNP spécifiques des corps de Cajal (scaRNP). Nopp140 interagit avec des composants essentiels des machineries de transcription et de maturation de l’ARNr et contribue à organiser l’architecture nucléolaire, reliant ainsi sa fonction à l’activité de l’ARN polymérase I, à la maturation du pré-ARNr et aux réponses au stress nucléolaire. Une perturbation de NOLC1 peut modifier la maturation de l’ARNr, l’intégrité du nucléole et la progression du cycle cellulaire, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques du contrôle de la croissance et de la signalisation du stress. Comme le dysfonctionnement nucléolaire est une caractéristique fréquente de divers états physiopathologiques, NOLC1 est souvent étudié comme marqueur et régulateur de l’homéostasie nucléolaire dans des modèles cellulaires pertinents pour la maladie.

Nopp140 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NOLC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NOLC1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NOLC1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NOLC1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.