Plasmide CRISPR d'Activation (h) NOP2: sc-409656-ACT

Le gène humain **NOP2** code une méthyltransférase nucléolaire de l’ARN impliquée dans la biogenèse des ribosomes via la modification et la maturation de l’ARNr, soutenant l’assemblage de la grande sous-unité ribosomique et une synthèse protéique efficace. L’activité de NOP2 est étroitement liée à la fonction nucléolaire, à la progression du cycle cellulaire et aux programmes de croissance proliférative, reflétant son rôle dans la coordination de la capacité de traduction avec les besoins cellulaires. Une expression dérégulée de NOP2 et des signatures de stress nucléolaire ont été rapportées dans de multiples contextes tumoraux, où une production ribosomique et un contrôle de la traduction altérés contribuent à des phénotypes oncogéniques. En conséquence, NOP2 est fréquemment étudié dans des voies reliant le traitement de l’ARNr, la régulation transcriptionnelle associée à la chromatine et l’homéostasie protéique.

NOP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NOP2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NOP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NOP2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NOP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NOP2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NOP2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NOP2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NOP2 dans les cellules tumorales présentant une expression de NOP2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.