Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO NOP17 (h): sc-407256
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- NOP17 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique NOP17, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: NOP17 Antibody (A-10): sc-514127
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO NOP17 (h) | sc-407256 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
PIH1D1 code NOP17, une cochaperonne conservée du complexe R2TP, qui coopère avec HSP90 pour favoriser la biogenèse, la stabilisation et l’assemblage de grandes machineries macromoléculaires. NOP17 soutient la maturation des snoRNP de type box C/D, contribue à la biogenèse des ribosomes et à l’homéostasie nucléolaire, et aide à assembler des complexes clés tels que l’ARN polymérase II et des modules de signalisation contenant des PIKK. Par ces fonctions, PIH1D1 relie le contrôle qualité médié par les chaperonnes au traitement des ARN, à la protéostase et aux voies sensibles au stress. Une dérégulation de l’assemblage dépendant de R2TP/HSP90 et de la biogenèse des ribonucléoprotéines a été associée à des phénotypes d’altération du contrôle de la croissance et du maintien du génome, pertinents pour la recherche mécanistique sur les maladies.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NOP17 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PIH1D1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PIH1D1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PIH1D1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NOP17.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PIH1D1 pour l'étude de la signalisation de NOP17, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de PIH1D1 essentiels à la fonction de NOP17
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PIH1D1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le NOP17 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NOP17 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PIH1D1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le NOP17 plasmide HDR (h) et le NOP17 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PIH1D1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PIH1D1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.