Plasmide CRISPR/Cas9 KO Noggin (h2): sc-402090-KO-2

Présentation

NOG code la noggine, une glycoprotéine sécrétée qui se lie aux ligands BMP et les neutralise (notamment BMP2, BMP4 et BMP7), modulant ainsi les gradients de signalisation de la superfamille BMP/TGF-β au cours du développement et dans l’homéostasie des tissus adultes. En antagonisant l’activation des récepteurs BMP et la phosphorylation en aval de SMAD1/5/8, la noggine influence les décisions de destin cellulaire, la différenciation ostéogénique et chondrogénique, ainsi que les processus de mise en place des patrons (patterning) dans les lignées mésenchymateuses et neurales. Une activité NOG altérée est associée à une morphogenèse squelettique et une formation des articulations dérégulées, et elle est fréquemment étudiée dans des contextes impliquant un remodelage et une différenciation anormaux pilotés par les BMP. En tant que modulateur extracellulaire clé de la signalisation des morphogènes, la noggine est pertinente pour les recherches en biologie du développement, biologie de l’os et du cartilage, et l’étude des interactions entre voies de signalisation, notamment avec les programmes WNT et FGF.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Noggin (h2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NOG dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NOG, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NOG à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Noggin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NOG pour l'étude de la signalisation de Noggin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NOG essentiels à la fonction de Noggin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NOG pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Noggin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Noggin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NOG. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Noggin plasmide HDR (h) et le Noggin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NOG pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NOG définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.