Plasmide CRISPR/Cas9 KO Nodal (h): sc-401439

Présentation

NODAL code pour Nodal, un morphogène sécrété de la superfamille TGF-β qui signale principalement via les récepteurs de l’Activine et SMAD2/3 afin de réguler la spécification du mésendoderme, la mise en place des axes gauche–droite et le maintien des programmes de pluripotence au cours du développement précoce. Dans les cellules humaines, Nodal s’intègre à des régulateurs de rétrocontrôle tels que LEFTY, et interagit par recoupement avec les voies WNT et FGF pour orienter les décisions de destinée cellulaire, les transitions épithélio-mésenchymateuses et les réseaux transcriptionnels contrôlant les états des cellules souches. Une expression aberrante de NODAL a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux et est fréquemment étudiée pour son association avec des phénotypes invasifs, la plasticité cellulaire et des circuits de signalisation liés à la résistance. En tant que nœud de voie de signalisation, Nodal est couramment étudié en biologie du développement, en biologie du cancer et dans des modèles de différenciation de cellules souches.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Nodal (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NODAL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NODAL, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NODAL à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Nodal.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NODAL pour l'étude de la signalisation de Nodal, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NODAL essentiels à la fonction de Nodal
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NODAL pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Nodal plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Nodal plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NODAL. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Nodal plasmide HDR (h) et le Nodal (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NODAL pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NODAL définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.