Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nocturnin: sc-405350-ACT

Le gène humain **NOCT** code la **Nocturnine**, une désadénylase de type CCR4 régulée par l’horloge circadienne, qui raccourcit les queues poly(A) afin de contrôler la stabilité des ARNm et l’efficacité de la traduction. La Nocturnine contribue à coupler les circuits de l’horloge aux programmes géniques métaboliques, en influençant des voies liées au métabolisme des lipides, à l’équilibre énergétique et à la transcription sensible aux nutriments. Par le remodelage post-transcriptionnel des transcrits, **NOCT** participe à la régulation rythmique de l’homéostasie cellulaire et à l’adaptation au stress. Une expression ou une activité dérégulée de **NOCT** a été associée à des phénotypes métaboliques altérés et a été étudiée dans le contexte de l’inflammation ainsi que de programmes d’expression génique liés au cancer.

Nocturnin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NOCT sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nocturnin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NOCT dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NOCT, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nocturnin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NOCT natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nocturnin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nocturnin dans les cellules tumorales présentant une expression de NOCT silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.