Plasmide CRISPR/Cas9 KO Nociceptin (m): sc-421945

Présentation

Pnoc code la nociceptine/orphanine FQ, un neuropeptide endogène ligand du récepteur de type opioïde 1 (OPRL1/NOP), qui module l’excitabilité neuronale et la transmission synaptique. La signalisation de la nociceptine mobilise des voies couplées à Gi/o qui diminuent l’activité de l’adénylate cyclase, régulent les effecteurs en aval du couple AMPc/PKA et influencent la conductance des canaux ioniques ainsi que la libération de neurotransmetteurs. Dans le système nerveux central et les tissus périphériques, cet axe contribue à la régulation de la nociception, de la réactivité au stress, des circuits de la récompense et de la fonction neuroendocrinienne. Une dérégulation de la signalisation PNOC–NOP a été impliquée dans des phénotypes liés au traitement de la douleur, à des comportements de type anxieux et dépressif, à des neuroadaptations associées à l’usage de substances, ainsi qu’à la modulation de l’inflammation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Nociceptin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Pnoc dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Pnoc, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Pnoc à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Nociceptin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Pnoc pour l'étude de la signalisation de Nociceptin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Pnoc essentiels à la fonction de Nociceptin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Pnoc pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Nociceptin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Nociceptin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Pnoc. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Nociceptin plasmide HDR (m) et le Nociceptin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Pnoc pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Pnoc définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.