Plasmide CRISPR/Cas9 KO NMT1 (m): sc-421916
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- NMT1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique NMT1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: NMT1 Antibody (E-9): sc-393702
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO NMT1 (m) | sc-421916 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le gène murin **Nmt1** code la N-myristoyltransférase 1 (NMT1), une enzyme clé qui catalyse la N-myristoylation co- et post-traductionnelle de protéines portant une glycine en position N-terminale. Cette modification lipidique régule l’association aux membranes, la stabilité des protéines et la propagation des signaux pour de nombreux substrats, influençant ainsi des processus tels que le trafic vésiculaire, la dynamique du cytosquelette, l’apoptose et la signalisation de l’immunité innée. L’activité de NMT1 s’articule avec des voies contrôlées par les kinases de la famille Src et les petites GTPases, modulant la croissance cellulaire et les réponses au stress. Une myristoylation protéique dérégulée a été associée à des états de signalisation oncogéniques ainsi qu’à des phénotypes immunitaires et neuronaux altérés, ce qui fait de **Nmt1** un nœud précieux pour des études mécanistiques.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NMT1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nmt1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nmt1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nmt1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NMT1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nmt1 pour l'étude de la signalisation de NMT1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Nmt1 essentiels à la fonction de NMT1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nmt1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le NMT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le NMT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nmt1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le NMT1 plasmide HDR (m) et le NMT1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nmt1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nmt1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.