Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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NMDAζ1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400593-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NMDAζ1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NMDAζ1 Double-Nickase-Plasmid (h) und NMDAζ1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GRIN1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: NMDAζ1: sc-518043
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NMDAζ1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400593-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NMDAζ1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400593-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRIN1 kodiert die menschliche NMDA‑Rezeptor‑Untereinheit ζ1 (GluN1), einen wesentlichen Bestandteil der NMDA‑Typ‑ionotropen Glutamatrezeptoren, die sich zu heterotetrameren Kanälen zusammenlagern und eine Ca²⁺‑permeable exzitatorische Neurotransmission vermitteln. Die Signalübertragung über NMDA‑Rezeptoren reguliert synaptische Plastizität, Lernen und Gedächtnis sowie aktivitätsabhängige Genexpression über Signalwege mit Beteiligung von CaMKII/CREB und nachgeschalteten Transkriptionsprogrammen. Die GRIN1‑abhängige Rezeptorfunktion greift zudem in Prozesse der neuronalen Entwicklung wie Synaptogenese und dendritisches Remodeling ein und trägt unter Bedingungen übermäßiger glutamaterger Stimulation zu exzitotoxischen Stressantworten bei. Genetische Variation oder eine Fehlregulation der NMDA‑Rezeptor‑Signalgebung wurde mit neuroentwicklungsbedingten und neuropsychiatrischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was mechanistische Untersuchungen der Rezeptorfunktion in krankheitsrelevanten zellulären Modellen unterstützt.
NMDAζ1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GRIN1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GRIN1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GRIN1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GRIN1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.