Plasmide Double Nickase (h) NMDAε4: sc-401683-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) NMDAε4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide NMDAε4 Double Nickase (h) et le plasmide NMDAε4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GRIN2D. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: NMDAε4 Antibody (G-10): sc-17822
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) NMDAε4 | sc-401683-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) NMDAε4 | sc-401683-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRIN2D code la sous-unité du récepteur NMDA humain NMDAε4 (GluN2D), un composant de canal ionique activé par ligand qui s’assemble avec GluN1 pour former des récepteurs fonctionnels au N-méthyl-D-aspartate. NMDAε4 contribue à la transmission synaptique glutamatergique en régulant l’influx de Ca²⁺, la cinétique d’ouverture/fermeture du récepteur et la signalisation en aval dépendante de l’activité, qui façonne le développement neuronal et l’excitabilité des circuits. Par son couplage à des voies dépendantes du calcium, elle influence la plasticité synaptique, les programmes de transcription et les réponses au stress excitotoxique dans le système nerveux central. Des variations ou une expression dérégulée de GRIN2D ont été associées dans la littérature à des phénotypes neurodéveloppementaux et liés aux crises, ce qui étaye son utilisation dans des études mécanistiques de la signalisation glutamatergique et du fonctionnement des réseaux neuronaux.
NMDAε4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GRIN2D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GRIN2D. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GRIN2D. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GRIN2D.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.