Plasmide Double Nickase (h) NMDAε2: sc-400654-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) NMDAε2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide NMDAε2 Double Nickase (h) et le plasmide NMDAε2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GRIN2B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: NMDAε2 Antibody (A-8): sc-365597
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) NMDAε2 | sc-400654-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) NMDAε2 | sc-400654-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRIN2B code la sous-unité NMDAε2 (GluN2B) des récepteurs au N‑méthyl‑D‑aspartate (NMDA), des canaux ioniques activés par un ligand qui régulent l’influx de Ca²⁺ lors de la neurotransmission excitatrice. Les récepteurs contenant NMDAε2 façonnent la plasticité synaptique, l’apprentissage et la mémoire en couplant l’activité neuronale à des voies de signalisation en aval telles que la transcription dépendante de CaMKII/CREB, la signalisation MAPK/ERK et le remodelage du cytosquelette dépendant de l’activité. La fonction de GRIN2B est étroitement liée au développement des synapses glutamatergiques et aux réponses au stress excitotoxique, en intégrant des signaux qui influencent la maturation des épines dendritiques et le raffinement des circuits. Les variations génétiques et la dérégulation de GRIN2B ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ce qui étaye son utilisation dans des études mécanistiques de la signalisation synaptique et du fonctionnement des réseaux neuronaux.
NMDAε2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GRIN2B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GRIN2B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GRIN2B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GRIN2B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.