Plasmide CRISPR d'Activation (h) NMDAε2: sc-400654-ACT

GRIN2B code la sous-unité du récepteur NMDA humain NMDAε2 (GluN2B), un composant de canal ionique activé par le glutamate qui régule l’entrée de Ca²⁺ lors de la neurotransmission excitatrice. Les récepteurs contenant NMDAε2 façonnent la plasticité synaptique, l’expression génique dépendante de l’activité et le développement neuronal via le couplage aux voies de signalisation CaMK/CREB, aux voies MAPK et à des programmes transcriptionnels en aval. La fonction de GRIN2B est étroitement liée à l’équilibre excitation–inhibition, à la maturation des épines dendritiques et au raffinement des circuits dans le système nerveux central. Une expression altérée de GRIN2B ou une signalisation anormale des récepteurs NMDA a été associée à des mécanismes de maladies neurodéveloppementales et neuropsychiatriques, notamment des troubles cognitifs, des phénotypes liés à l’épilepsie et des synaptopathies.

NMDAε2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GRIN2B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NMDAε2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GRIN2B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GRIN2B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NMDAε2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GRIN2B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NMDAε2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NMDAε2 dans les cellules tumorales présentant une expression de GRIN2B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.