Plasmide Double Nickase (h) nm23-H1: sc-401221-NIC

NME1 code nm23-H1, une nucléoside diphosphate kinase exprimée de façon ubiquitaire, qui régule l’homéostasie des nucléotides cellulaires et participe à la transduction du signal, au remodelage du cytosquelette et au trafic membranaire. Au-delà de son activité enzymatique, nm23-H1 a été associée au contrôle de la motilité cellulaire, de la différenciation et des réponses au stress via des interactions avec les voies des petites GTPases et des réseaux de kinases. Des altérations de l’expression et de la fonction de NME1 ont été mises en relation avec des changements du comportement invasif et du potentiel métastatique dans de nombreux contextes tumoraux, et NME1 est fréquemment étudié en lien avec des phénotypes associés à la prolifération et aux dommages de l’ADN. Ces caractéristiques font de NME1 une cible utile pour disséquer les mécanismes de migration, de stabilité du génome et de dialogue entre voies de signalisation dans les cellules humaines.

nm23-H1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NME1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NME1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NME1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NME1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.