Plásmido CRISPR de Activación (h) Nkx-2.3: sc-406709-ACT

NKX2-3 codifica el factor de transcripción con homeobox Nkx-2.3, un regulador de unión al ADN específico de secuencia que ayuda a establecer y mantener programas de identidad regional durante el desarrollo y en tejidos adultos. Influye en redes transcripcionales que controlan la diferenciación epitelial y mesenquimal, el patrón tisular y las decisiones de destino celular, con efectos posteriores sobre la expresión génica restringida a linajes y la señalización del microambiente. La alteración de la actividad de NKX2-3 se ha asociado con una homeostasis inmunitaria mucosa desregulada y con cambios en la biología intestinal, lo que respalda su relevancia en estudios sobre regulación génica vinculada a la inflamación y circuitos transcripcionales asociados a enfermedad. Como factor nuclear que actúa en elementos promotores y potenciadores, Nkx-2.3 constituye un nodo útil para analizar mecanismos de control transcripcional dependientes del contexto.

Nkx-2.3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NKX2-3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nkx-2.3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NKX2-3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NKX2-3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nkx-2.3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NKX2-3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nkx-2.3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nkx-2.3 en células tumorales con expresión de NKX2-3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.