Plasmide CRISPR/Cas9 KO Nkx-2.2 (m): sc-421901

Présentation

Nkx2-2 code le facteur de transcription à homeobox Nkx-2.2, un régulateur nucléaire essentiel à la mise en place des patrons embryonnaires et à la spécification des lignages dans le système nerveux central en développement ainsi que dans les tissus dérivés de l’endoderme. Dans le tube neural ventral, Nkx-2.2 agit en aval de la signalisation Sonic hedgehog pour établir des domaines de progéniteurs et déclencher des programmes de différenciation, en coordonnant des réseaux de régulation génique qui façonnent l’identité des sous-types neuronaux. Dans le pancréas, Nkx-2.2 contribue au développement et à la maturation des cellules endocrines en contrôlant des programmes transcriptionnels liés à l’attribution des lignages des îlots et à l’expression hormonale. La dérégulation de circuits transcriptionnels dépendants de NKX2-2 a été associée à des trajectoires neurodéveloppementales altérées et à des perturbations de la différenciation endocrinienne, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans les études de biologie du développement et de modélisation des maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Nkx-2.2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nkx2-2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nkx2-2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nkx2-2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Nkx-2.2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nkx2-2 pour l'étude de la signalisation de Nkx-2.2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Nkx2-2 essentiels à la fonction de Nkx-2.2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nkx2-2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Nkx-2.2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Nkx-2.2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nkx2-2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Nkx-2.2 plasmide HDR (m) et le Nkx-2.2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nkx2-2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nkx2-2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.