Nkx-2.2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421901
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Nkx-2.2 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Nkx-2.2-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Nkx-2.2: sc-398951
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Nkx-2.2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-421901 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Nkx2-2 kodiert den Homeobox-Transkriptionsfaktor Nkx-2.2, einen nukleären Regulator, der für die embryonale Musterbildung und die Festlegung von Zelllinien im sich entwickelnden zentralen Nervensystem sowie in endoderm-abgeleiteten Geweben essenziell ist. Im ventralen Neuralrohr wirkt Nkx-2.2 nachgeschaltet der Sonic-Hedgehog-Signalgebung und trägt zur Etablierung von Vorläuferdomänen sowie zur Aktivierung von Differenzierungsprogrammen bei, indem es genregulatorische Netzwerke koordiniert, die die Identität neuronaler Subtypen prägen. Im Pankreas unterstützt Nkx-2.2 die Entwicklung und Reifung endokriner Zellen, indem es Transkriptionsprogramme steuert, die mit der Zuordnung zu Inselzell-Linien und der Hormonexpression verknüpft sind. Eine Fehlregulation NKX2-2-abhängiger Transkriptionsschaltkreise wurde mit veränderten neuroentwicklungsbezogenen Verläufen und Störungen der endokrinen Differenzierung in Zusammenhang gebracht, was seine Nutzung als mechanistischer Knotenpunkt in der Entwicklungsbiologie und in krankheitsmodellierenden Studien stützt.
Das Nkx-2.2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Nkx2-2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Nkx2-2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Nkx2-2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Nkx-2.2-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Nkx2-2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Nkx-2.2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Nkx2-2-Exone abzielen, die für die Nkx-2.2-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Nkx2-2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Nkx-2.2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Nkx-2.2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Nkx2-2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Nkx-2.2 HDR-Plasmid (m) und Nkx-2.2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Nkx2-2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Nkx2-2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.