Plasmide CRISPR/Cas9 KO NKD1 (h): sc-406642

Présentation

NKD1 (naked cuticle homolog 1) code un régulateur cytoplasmique de rétrocontrôle de la signalisation Wnt/β-caténine, qui se lie aux protéines Dishevelled afin d’atténuer l’activation de la voie. En modulant des programmes transcriptionnels dépendants de la β-caténine, NKD1 influence les décisions de destinée cellulaire, la différenciation épithéliale et l’homéostasie tissulaire. Une expression ou une fonction altérée de NKD1 a été associée à une dérégulation de la signalisation Wnt dans des contextes liés au cancer, notamment via des effets sur la prolifération, la migration et des signatures transcriptionnelles pilotées par la voie. En tant que modulateur de la voie Wnt, NKD1 est fréquemment étudié dans des modèles de signalisation oncogénique, de biologie du développement et de régulation des cellules épithéliales.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NKD1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NKD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NKD1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NKD1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NKD1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NKD1 pour l'étude de la signalisation de NKD1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NKD1 essentiels à la fonction de NKD1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NKD1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NKD1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NKD1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NKD1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NKD1 plasmide HDR (h) et le NKD1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NKD1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NKD1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.