Plasmide Double Nickase (h) NKCC1: sc-416328-NIC

SLC12A2 code NKCC1 (cotransporteur Na⁺-K⁺-2Cl⁻ 1), un transporteur électroneutre qui couple l’entrée de sodium, de potassium et de chlorure afin de réguler les niveaux intracellulaires de chlorure, le volume cellulaire, ainsi que le transport épithélial des fluides et des électrolytes. L’activité de NKCC1 module l’excitabilité membranaire dépendante du chlorure et l’homéostasie osmotique, en interaction avec la signalisation des kinases WNK–SPAK/OSR1, qui ajuste la phosphorylation du transporteur et les flux ioniques. Dans les tissus humains, NKCC1 contribue à la fonction des épithéliums sécrétoires et à l’équilibre du chlorure neuronal, des processus pertinents pour la physiologie des barrières, la signalisation sensorielle et les réponses inflammatoires. Une expression ou une activité de transport SLC12A2/NKCC1 dérégulée a été impliquée dans des troubles associés à l’hydratation épithéliale, à un gonflement cellulaire anormal et à une altération des réseaux de signalisation dépendants du chlorure.

NKCC1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SLC12A2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SLC12A2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SLC12A2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SLC12A2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.