Plasmide CRISPR d'Activation (h) NK-1R: sc-401004-ACT

TACR1 code le récepteur humain de la neurokinine‑1 (NK‑1R), un GPCR de classe A qui se lie au neuropeptide tachykinine substance P et se couple principalement à la signalisation Gq/11. L’activation de NK‑1R favorise la mobilisation d’inositol phosphates et de calcium dépendante de la phospholipase C, avec, en aval, l’engagement de la PKC, de la voie MAPK/ERK et de programmes transcriptionnels qui modulent l’excitabilité neuronale, l’inflammation neurogène et la contractilité du muscle lisse. TACR1 est exprimé dans les systèmes nerveux central et périphérique, ainsi que dans des compartiments immunitaires et épithéliaux, reliant la communication neuro‑immune aux réponses de barrière et vasculaires. Une signalisation TACR1/NK‑1R altérée a été associée à la biologie de l’inflammation et de la douleur, à des dysrégulations des voies respiratoires et gastro‑intestinales, ainsi qu’à des modifications dépendantes du contexte de la signalisation du microenvironnement tumoral, ce qui étaye des études mécanistiques dans des modèles cellulaires pertinents pour la maladie.

NK-1R Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TACR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NK-1R Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TACR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TACR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NK-1R. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TACR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NK-1R au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NK-1R dans les cellules tumorales présentant une expression de TACR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.