Plasmide Double Nickase (m) NIPBL: sc-427895-NIC

Nipbl code pour NIPBL, un facteur de chargement de la cohésine qui coordonne la cohésion des chromatides sœurs et l’organisation de la chromatine à un niveau supérieur au cours du cycle cellulaire. Dans les cellules de souris, NIPBL soutient la communication à longue distance entre enhancers et promoteurs ainsi que des programmes de contrôle transcriptionnel qui gouvernent le développement embryonnaire, la spécification des lignages et les réponses aux dommages de l’ADN. La perturbation de Nipbl altère l’architecture du génome dépendante de la cohésine et peut influencer la signalisation du stress de réplication, la ségrégation chromosomique et les réseaux d’expression génique. Étant donné que l’altération de la fonction de NIPBL est associée à une dérégulation des gènes du développement et à des défauts de stabilité du génome, il constitue une cible utile pour étudier les cohésinopathies et les mécanismes de maladies associés à la chromatine, dans des modèles in vivo et in vitro.

NIPBL Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Nipbl dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Nipbl. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Nipbl. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Nipbl.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.