Plasmide CRISPR d'Activation (h) Ninjurin-2: sc-408142-ACT

NINJ2 code la Ninjurine‑2, une protéine d’adhérence de surface cellulaire impliquée dans la signalisation dépendante du contact, la dynamique membranaire et la modulation de la migration cellulaire. Les membres de la famille des Ninjurines sont associés aux réponses aux lésions tissulaires et aux signaux inflammatoires, ce qui étaye leur rôle dans le trafic des leucocytes, la croissance des neurites et les interactions glie–neurone. En génétique humaine et dans des études fonctionnelles, NINJ2 a été relié à des phénotypes neurovasculaires et neuro‑inflammatoires, ce qui motive l’exploration de l’impact d’une expression altérée de NINJ2 sur les réponses au stress cellulaire et la communication intercellulaire. Ces propriétés font de la Ninjurine‑2 un acteur pertinent des voies qui régissent l’adhérence, la signalisation immunitaire et l’homéostasie du système nerveux.

Ninjurin-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NINJ2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ninjurin-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NINJ2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NINJ2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ninjurin-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NINJ2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ninjurin-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ninjurin-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de NINJ2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.