Particules Lentivirales d'Activation (m2) NIK: sc-424749-LAC-2

Le gène murin Map3k14 code la kinase inductrice de NF-κB (NIK), une MAP3K qui agit comme activateur central de la voie non canonique de NF-κB en favorisant, en aval de récepteurs tels que BAFFR, CD40, LTβR et RANK, la maturation de NF-κB2 p100 en p52 dépendante d’IKKα. La signalisation de NIK régule l’organogenèse des organes lymphoïdes, la maturation et la survie des lymphocytes B, la différenciation des ostéoclastes ainsi que des programmes transcriptionnels inflammatoires, via la coordination de l’activité des réseaux MAPK et NF-κB. Une activité dérégulée de Map3k14/NIK est associée à une homéostasie immunitaire anormale et à une inflammation chronique, avec des implications pour des phénotypes auto-immuns et une physiopathologie portée par les lymphocytes B dans des modèles expérimentaux. L’édition génomique de Map3k14 chez la souris permet des études mécanistiques de la signalisation proximale aux récepteurs, du contrôle transcriptionnel et des contributions spécifiques de chaque type cellulaire à la signalisation NF-κB non canonique dans la recherche en immunologie et en inflammation.

Les particules d'activation lentivirales NIK (m2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Map3k14 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales NIK (m2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Map3k14, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de NIK. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Map3k14 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.