Plásmido CRISPR de Activación (m) Nidogen: sc-421895-ACT

El gen murino **Nid1** codifica nidógeno (entactina), una glucoproteína central de la membrana basal que conecta las redes de laminina y de colágeno tipo IV para estabilizar la arquitectura de la matriz extracelular. El nidógeno favorece la adhesión célula–matriz, la compartimentación tisular y la presentación de señales que influyen en vías asociadas a integrinas y factores de crecimiento que regulan la migración, la polaridad y la diferenciación. En el sistema nervioso, **Nid1** contribuye a la integridad de las redes perineuronales y de la membrana basal vascular, lo que repercute en la estabilización sináptica y en las interacciones neurovasculares. La alteración de la organización de la matriz dependiente de nidógeno es relevante para estudios de defectos del desarrollo, remodelación similar a la fibrosis y comportamiento invasivo asociado a una dinámica desregulada de la matriz extracelular.

Nidogen El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Nid1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nidogen El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Nid1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Nid1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nidogen. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Nid1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nidogen en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nidogen en células tumorales con expresión de Nid1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.