Plasmide CRISPR d'Activation (m) Nidogen: sc-421895-ACT

Le gène murin **Nid1** code la nidogène (entactine), une glycoprotéine fondamentale de la membrane basale qui fait le lien entre les réseaux de laminine et de collagène de type IV afin de stabiliser l’architecture de la matrice extracellulaire. La nidogène favorise l’adhérence cellule–matrice, la compartimentation des tissus et la présentation de signaux influençant des voies liées aux intégrines et aux facteurs de croissance, qui gouvernent la migration, la polarité et la différenciation. Dans le système nerveux, **Nid1** contribue à l’intégrité des filets périneuronaux et des membranes basales vasculaires, avec des effets sur la stabilisation synaptique et les interactions neurovasculaires. Une organisation de la matrice dépendante de la nidogène altérée est pertinente pour l’étude des défauts du développement, du remodelage de type fibrotique et des comportements invasifs associés à une dynamique dérégulée de la matrice extracellulaire.

Nidogen Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Nid1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nidogen Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Nid1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Nid1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nidogen. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Nid1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nidogen au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nidogen dans les cellules tumorales présentant une expression de Nid1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.