Plasmide Double Nickase (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG: sc-403321-NIC

CHRNG code la sous-unité gamma du récepteur nicotinique de l’acétylcholine (nAChR) de type musculaire, un canal ionique ligand‑dépendant qui assure une transmission synaptique rapide à la jonction neuromusculaire. Au cours du développement fœtal et périnatal, le récepteur contenant la sous-unité gamma contribue à la dépolarisation membranaire dépendante de l’acétylcholine, aux flux de cations et au couplage excitation–contraction, soutenant la maturation musculaire et l’innervation motrice. La fonction de CHRNG s’intègre aux voies de signalisation cholinergique, à l’organisation de la membrane postsynaptique et aux programmes de différenciation des fibres musculaires dépendants de l’activité. Des variations génétiques ou une dérégulation de CHRNG ont été associées à des troubles neuromusculaires congénitaux caractérisés par une diminution des mouvements fœtaux et une formation anormale de la jonction neuromusculaire, ce qui en fait une cible utile pour étudier la synaptogenèse développementale et l’assemblage des canaux.

Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CHRNG dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CHRNG. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CHRNG. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CHRNG.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.