Plasmide CRISPR/Cas9 KO Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG (m): sc-418961

Présentation

Chrng code la sous-unité gamma du récepteur nicotinique de l’acétylcholine (nAChR), un canal cationique activé par un ligand qui s’assemble avec d’autres sous-unités musculaires du nAChR pour assurer la dépolarisation dépendante de l’acétylcholine à la jonction neuromusculaire. Au cours du développement chez la souris, CHRNG est un composant clé du complexe récepteur fœtal et contribue à la synaptogenèse, à la maturation du muscle squelettique dépendante de l’activité, ainsi qu’au contrôle de l’excitabilité via un flux ionique rapide et une signalisation en aval liée au Ca2+. Une expression altérée de CHRNG ou une modification de la composition en sous-unités peut perturber la transmission neuromusculaire et les programmes de différenciation des myofibres, offrant un point d’entrée mécanistique pour étudier des phénotypes neuromusculaires congénitaux et développementaux. Ce gène est donc pertinent pour les voies qui régissent la formation de la plaque motrice, le couplage excitation–contraction et la temporalité du développement musculaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Chrng dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Chrng, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Chrng à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Chrng pour l'étude de la signalisation de Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Chrng essentiels à la fonction de Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Chrng pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Chrng. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG plasmide HDR (m) et le Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Chrng pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Chrng définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.