Plásmido CRISPR de Activación (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG: sc-403321-ACT

CHRNG codifica la subunidad gamma del receptor nicotínico de acetilcolina (nAChR), un canal iónico activado por ligando que media el flujo de cationes dependiente de acetilcolina y la despolarización de la membrana en el músculo esquelético en desarrollo. El receptor que contiene la subunidad gamma es un sello distintivo del músculo fetal o denervado y es reemplazado por la subunidad épsilon en las uniones neuromusculares maduras, lo que vincula a CHRNG con la sinaptogénesis del desarrollo y el cambio de subunidades del receptor. Mediante su participación en la señalización colinérgica y en programas de diferenciación muscular dependientes de la actividad, CHRNG influye en la transmisión neuromuscular y la excitabilidad. Las variaciones patogénicas en CHRNG se han asociado con fenotipos miasténicos congénitos y síndromes relacionados con la acinesia fetal, lo que lo hace relevante para estudios del desarrollo neuromuscular y de los mecanismos de enfermedad.

Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CHRNG sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CHRNG en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CHRNG, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CHRNG y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG en células tumorales con expresión de CHRNG silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.