Plasmide CRISPR/Cas9 KO Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE (m): sc-418960

Présentation

Chrne code la sous-unité epsilon du récepteur nicotinique de l’acétylcholine (nAChR) de type musculaire, un canal ionique activé par un ligand, concentré dans la membrane postsynaptique de la jonction neuromusculaire. L’incorporation de CHRNE dans le récepteur mature soutient la transmission synaptique en permettant un influx de cations déclenché par l’acétylcholine, qui dépolarise la plaque motrice et initie le couplage excitation–contraction. La fonction de CHRNE est étroitement liée à la maturation et au maintien de la synapse via des voies qui régissent l’agrégation des récepteurs, l’architecture de la plaque motrice et la signalisation dépendante de l’activité. L’altération de CHRNE est associée aux syndromes myasthéniques congénitaux et à des défauts apparentés de la transmission neuromusculaire, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la fonction motrice et des synaptopathies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Chrne dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Chrne, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Chrne à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Chrne pour l'étude de la signalisation de Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Chrne essentiels à la fonction de Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Chrne pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Chrne. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE plasmide HDR (m) et le Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Chrne pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Chrne définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.