Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE: sc-404780-ACT

CHRNE code la sous-unité epsilon du récepteur nicotinique de l’acétylcholine (nAChR) de type musculaire, un canal ionique ligand-dépendant qui s’assemble dans la membrane postsynaptique de la jonction neuromusculaire afin d’assurer une transmission synaptique rapide. Lors de la liaison de l’acétylcholine, le récepteur s’ouvre et permet l’entrée de cations, couplant la signalisation du neurotransmetteur à la dépolarisation de la membrane ainsi qu’aux processus d’excitation–contraction. L’expression de CHRNE est régulée au cours du développement et contribue, dans le muscle squelettique mature, à la composition du récepteur, à sa localisation et à la cinétique du canal. Des perturbations génétiques de CHRNE et d’autres composants du nAChR sont associées à des syndromes myasthéniques congénitaux, ce qui en fait un locus clé pour l’étude de la signalisation neuromusculaire, du maintien des synapses et des voies d’assemblage des récepteurs.

Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CHRNE sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CHRNE dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CHRNE, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CHRNE natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE dans les cellules tumorales présentant une expression de CHRNE silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.