Plasmide Double Nickase (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1: sc-404205-NIC

CHRNB1 code la sous-unité β1 du récepteur nicotinique de l’acétylcholine (nAChR) de type musculaire, un canal cationique ligand‑dépendant essentiel à la transmission synaptique rapide au niveau de la jonction neuromusculaire. Intégrée à des complexes récepteurs pentamériques, CHRNB1 contribue au contrôle de l’ouverture du canal dépendante de l’acétylcholine, à la dépolarisation membranaire et au couplage excitation–contraction qui sous-tend l’activation des muscles squelettiques. La signalisation du nAChR s’articule avec l’homéostasie ionique et des voies dépendantes de l’activité qui régulent le développement musculaire, la stabilité des synapses et le renouvellement des récepteurs. Une altération génétique ou un dysfonctionnement de CHRNB1 est associé(e) aux syndromes myasthéniques congénitaux et à des défauts apparentés de transmission neuromusculaire, ce qui en fait une cible majeure pour les études mécanistiques de la signalisation synaptique et de la physiologie musculaire.

Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CHRNB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CHRNB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CHRNB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CHRNB1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.