Partículas Lentivirales de Activación (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9: sc-402753-LAC

CHRNA9 codifica la subunidad alfa 9 del receptor nicotínico de acetilcolina, un componente de canal iónico activado por ligando que se ensambla con subunidades asociadas para mediar el flujo de cationes inducido por acetilcolina y la señalización posterior dependiente de Ca2+. La actividad del receptor vinculada a CHRNA9 influye en la excitabilidad de la membrana, la señalización colinérgica sináptica y no neuronal, y la modulación de respuestas celulares a través de vías acopladas a la homeostasis iónica y a cascadas de segundos mensajeros. En tejidos humanos, los cambios en la expresión de CHRNA9 o en la función del receptor se han asociado con procesos sensoriales e inflamatorios, y se han estudiado en el contexto de fenotipos de señalización relacionados con el cáncer y otros trastornos que implican vías colinérgicas desreguladas. Como resultado, CHRNA9 es una diana útil para analizar la composición de subunidades de los receptores nicotínicos, programas transcripcionales dependientes del estímulo y transiciones de estado celular impulsadas por señales colinérgicas.

Las partículas de activación lentiviral Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CHRNA9 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CHRNA9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CHRNA9 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.