Plasmide Double Nickase (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7: sc-416614-NIC

CHRNA7 code la sous-unité α7 du récepteur nicotinique de l’acétylcholine, un canal cationique homopentamérique activé par un ligand qui assure une signalisation cholinergique rapide et l’entrée de calcium. L’activité du nAChR α7 influence des voies intracellulaires dépendantes du Ca²⁺, notamment MAPK/ERK, PI3K–AKT et la signalisation CaMK, modulant ainsi la libération de neurotransmetteurs, la plasticité synaptique et l’excitabilité neuronale. Dans les contextes immunitaire et glial, CHRNA7 participe à la modulation des réponses inflammatoires via la régulation cholinergique de la production de cytokines. Une expression ou une fonction dérégulée de CHRNA7 a été associée à la biologie de maladies neuropsychiatriques et neurodégénératives, et ce gène est largement étudié dans le cadre de la cognition, du filtrage sensoriel (sensory gating) et des dysfonctionnements neuronaux liés à l’inflammation.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CHRNA7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CHRNA7. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CHRNA7. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CHRNA7.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.