Plasmide CRISPR/Cas9 KO Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 6/CHRNA6 (m): sc-418955

Présentation

Chrna6 code la sous-unité α6 des récepteurs nicotiniques neuronaux de l’acétylcholine (nAChR), des canaux cationiques activés par ligand qui modulent l’excitabilité membranaire et la libération de neurotransmetteurs en réponse à l’acétylcholine et à la nicotine. Les nAChR contenant α6 sont enrichis dans les circuits dopaminergiques et autres circuits catécholaminergiques, où ils régulent l’entrée de calcium et façonnent la signalisation synaptique ainsi que la plasticité. Via les voies de neurotransmission cholinergique, CHRNA6 contribue à l’activité des réseaux liés à la récompense et à la neuromodulation induite par les stimuli. Des variations génétiques et fonctionnelles de CHRNA6 ont été associées à des réponses modifiées à la nicotine et à des phénotypes neurocomportementaux, ce qui soutient sa pertinence pour la biologie de l’addiction et les modèles de dysfonctionnement des circuits dopaminergiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 6/CHRNA6 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Chrna6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Chrna6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Chrna6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 6/CHRNA6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Chrna6 pour l'étude de la signalisation de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 6/CHRNA6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Chrna6 essentiels à la fonction de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 6/CHRNA6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Chrna6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 6/CHRNA6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 6/CHRNA6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Chrna6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 6/CHRNA6 plasmide HDR (m) et le Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 6/CHRNA6 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Chrna6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Chrna6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.