Plasmide Double Nickase (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5: sc-401702-NIC

CHRNA5 code la sous-unité accessoire α5 des récepteurs nicotiniques de l’acétylcholine neuronaux (nAChR). Elle s’assemble avec d’autres sous-unités α et β pour moduler la cinétique d’ouverture des canaux cationiques activés par ligand, la perméabilité au Ca²⁺ et la désensibilisation du récepteur. Par la signalisation cholinergique, les nAChR contenant α5 influencent l’excitabilité membranaire et la libération de neurotransmetteurs, en lien avec des voies en aval dépendantes du calcium et des programmes de plasticité synaptique. Des variations génétiques et des modifications d’expression de CHRNA5 ont été associées à la dépendance à la nicotine et à des phénotypes liés au tabagisme, et ont également été étudiées dans le cadre de traits neuropsychiatriques ainsi que de la biologie de l’épithélium des voies aériennes pertinente pour l’exposition à la fumée. En tant que sous-unité modulatrice, CHRNA5 constitue un levier exploitable pour analyser comment la composition des récepteurs ajuste le fonctionnement des circuits cholinergiques et les réponses transcriptionnelles dépendantes du stimulus.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CHRNA5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CHRNA5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CHRNA5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CHRNA5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.