Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401582-ACT

CHRNA3 kodiert die α3-Untereinheit neuronaler nikotinischer Acetylcholinrezeptoren (nAChRs), ligandengesteuerter Kationenkanäle, die eine schnelle synaptische Übertragung vermitteln und die Membranerregbarkeit durch Na⁺- und Ca²⁺-Einstrom regulieren. α3-haltige nAChRs sind besonders in autonomen Ganglien und in ausgewählten neuronalen Schaltkreisen vertreten, wo sie die Neurotransmitterfreisetzung, calciumabhängige Signalwege und die aktivitätsabhängige Genexpression beeinflussen. Über cholinerge Signalübertragung trägt CHRNA3 zu Signalwegen bei, die die neuronale Differenzierung, synaptische Plastizität und die Reiz‑Sekretions‑Kopplung steuern. Genetische und Expressionsstudien haben Varianten im CHRNA3-Lokus sowie eine veränderte Rezeptoraktivität mit Nikotinabhängigkeit und weiteren neuropsychiatrischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für die Suchtbiologie und die Erforschung der Funktion neuronaler Schaltkreise unterstreicht.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CHRNA3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CHRNA3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CHRNA3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CHRNA3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CHRNA3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.